Partícula de reconocimiento de la señal en yarrowia lipolyticacaracterización del gen yisrp72 y análisis del péptido señal

Resumen

En levaduras existen al menos dos vías de transporte de las proteínas de secreción a través del retículo endoplásmico. En la vía contraduccional dependiente de la SRP, ésta se une a la secuencia señal cuando emerge la proteína que se está sintetizando en el ribosoma. Esta interacción provoca una pausa en la elongación y en la traducción de la proteína. Una vez que el complejo SRP-ribosoma-proteína naciente llegan a la membrana del retículo endoplásmico, la proteína es translocada al lumen a la vez que continúa su síntesis. Los eventos de translocación son llevados a cabo por un complejo proteico de la membrana del RE, el translocón. La partícula del reconocimiento de la señal se compone de un 7SLRNA y seis polipéptidos. El aislamiento de los componentes de la SRP en Yarrowia lipolytica es el primer paso para el estudio de su función. La maquinaria de translocación de Yarrowia lipolytica presenta nuevas características frente a las de Saccharomyces cerevisiae. El gen YISRP72 codifica una proteína putativa de 538 animo ácidos (MW, 59,5 kDa). El análisis de Northern blot mostró un transcritó único de YISRP72 de 1.8 kb. Así mismo se encontró que la secuencia de aminoácidos de la proteína YISrp72p presenta identidad con la proteína Srp72p de otras levaduras (Saccharomyces cerevisiae y Schizosaccharomyces pombe). La interrupción del gen YISRP72, se llevó a cabo por el método de pop out y se encontró que la deleción del gen YISRP72 es letal para el microorganismo. Esto concuerda con el obtenido en los resultados para otro componente de la SRP, el gen YISEC652. La microscopia fluorescente nos mostró que la fusión YISrp72-GFPp se localiza en el citoplasma las mutaciones en la posición -1 de un péptido señal sintético par Y. Lipolytica produjeron cambios en la secreción de la enzima invertasa obtenida de S. Cerevisiae. La sustitución de alanina por fenilalanina produjo un incremento en la