Clonacion y caracterizacion molecular del gen que codifica sintetasa de riboflavina en s. Cerevisiae

Résumé

El gen rib5 de saccharomyces cerevisiae se ha aislado por complementacion homologa de la mutacion rib5-10 de una genoteca genomica como un fragmento kpni-acci de 1.6 kb. El gen se transcribe dando una especie unica de arnn con una longitud de 0.85 kb. El gen codifica para un polipeptido de 238 aminoacidos con un tamaño molecular de 24.5 kda y con actividad especifica sintetasa de riboflavina. La enzima ha sido purificada tratandose de una proteina oligomerica formada por tres monomeros identicos de proteina rib5. El gen rib5 en la levadura tiene un nivel de expresion bajo pero se ha conseguido incrementar sus niveles mediante la sustitucion de su region promotora por el promotor del gen pgk obteniendose niveles de expresion de hasta 80 veces superior a los que presenta el gen bajo el control de su propio promotor.