Estudios in vivo E in vitro del tallo ribosómico de Saccharomyces cerevisiae mediante técnicas biofísicas y bioquímicas

Resumen

El tallo ribosómico es una estructura protuberante lateral muy flexible en la subunidad mayor del ribosoma. En procariotas, está compuesta por una proteína central llamada L10, y otras cuatro proteínas denominadas ácidas que se unen en forma de dímeros L7/L12. Es S. cerevisiae la complejidad es mayor, ya que además de la proteína central, denominada en este caso P0, hay 4 proteínas ácias distintas: P1a, P1b, P2a y P2b. Aunque la mayoría de datos experimentales apuntan a que estas proteínas ácidas se unen en forma de monómeros a los ribosomas, y por tanto estos siguen una distribución homogénea en la célula, con tallos compuestos por una proteína ácida de cada tipo. Sin embargo, ciertos datos de entrecruzamiento químico, la comparación con procariotas, y la capacidad de P2b en solución de formar homodímeros, hacen pensar que también pudiera darse un modelo heterogéneo de composición de los ribosomas, con distintas combinaciones de homodímeros de las proteínas ácidas. Todo esto tiene una importancia no sólo estructural, sino también funcional, ya que en función de las proteínas ácidas unidas al ribosoma, se ha comprobado que varía el patrón de proteínas que la célula expresa. Con el objetivo general de dilucidar la presencia o ausencia de homodímeros de proteínas ácidas en el ribosoma, y discriminar entre la existencia del modelo homogéneo o heterogéneo de composición del tallo ribosómico, se plantearon una serie de objetivos y técnicas específicas. En primer lugar, se sustituyeron residuos de algunas proteínas proteínas ácidas por cisteínas y se realizaron experimentos de entrecruzamiento químico. Los resultados obtenidos son compatibles con un modelo homogéneo de composición del tallo ribosómico, y también muestran una interacción directa entre P2a y P1b. Se comprueba además, que la aparición de homodímeros de P2a (con un residuo mutado a cisteína) en cepas en las que se ha el