Caracterización de una UDPG-dh (UDP-Glucosa deshidrogenasa) de "Xanthomonas albilineans" y su papel en la patogenicidad

Résumé

Se ha procedido a la purificación y caracterización de la enzima UDPG-dh procedente de la bacteria Xanthomonas albilineans, viendose que cataliza una reacción redox donde la UDPG es transformada en ácido UDP-GlcA utilizando NADPH como cofactor y oxígeno molecular. Debido a la sensibilidad que presenta esta enzima a las proteasas bacterianas es necesario la inclusión de un coktail inhibidor de éstas en el medio de cultivo. Del proceso de purificación de UDPG-dh mediante la técnica de Electroforesis Capilar se ha obtenido un único pico con un tiempo de migración de 32,44 min. Esta enzima se comporta como una proteína aniónica y su pl es de 8,98. * Su peso molecular ha sido estimado en 14,10 KDa. * El valor de Km para UDPG (substrato de la enzima), ha sido de 0,87 mM. Se comporta como una enzima alostérica frente al NADPH, con un coeficiente de interacción de 3,0. Para concentraciones de NADPH superiores a 0,22 mm, la enzima queda inhibida. * El ph óptimo de esta udpg-dh de x.albilineans ha sido de 6,8 y su temperatura óptima es de 37º. * La secuencia del extremo N-terminal de UDPG-dh de X.albilineans ha sido determinada como l(isoleucina), Q(glutamina), P(prolina), Y(Tirosina), N(asparagina, H(histidina). Se ha estudiado el papel de la glicoproteínas en la síntesis de esta enzima y se ha podido comprobar que las glicoproteínas HMMG y MMMG procedentes de la caña de azúcar muestran tener un papel inhibitorio frente las proteasas sintetizadas por X.albilineans. Se ha analizado la molécula del xantano producido por la bacteria y se han estudiado las alteraciones producidas en el proceso de cristalización de la sacarosa originadas por el xantano secretado por la bacteria.