Caracterización bioquímica y molecular de la acc oxidasa en semillas de cicer arietinum I

Résumé

Se aisla un ADNc de cadena completa (caaco1) a partir de ARN de ejes embrionarios de semillas de garbanzo (Cicer arietinum L. var. Castellana). Este ADNc presenta una alta homología con ACC oxidasas de diferentes especies de plantas y su expresión heteróloga en E.coli induce una proteína de 38 kDa que es reconocida por un anticuerpo obtenido frente a la ACC oxidasa de manzana. Los extractos de bacterias que expresan dicha proteína presentan actividad ACC oxidasa in vitro. Por todo ellos podemos afirmar que caaco1 codifica a una ACC oxidasa de garbanzo. Se obtiene una IgG monoespecífica frente a la ACC oxidasa (38 kDa) y se utiliza para los experimentos de inmunolocalización en ejes embrionarios. Los resultados demuestran una doble ubicación de esta proteína: extracelular (apoplasto y pared celular) e intracelular (citosol), no encontrándose evidencias de una localización vacuolar. El abordaje del mecanismo de transporte de la ACC oxidasa a través del plasmalema está siendo diseñado. Se aisla, a partir de ARN de ejes embrionarios de semillas de garbanzo, un ADNc que codifica a una posible ACC sintasa. Este ADNc muestra una elevada homología con otras secuencias de ACC sintasa de plantas. Mediante análisis genómico se demuestra que la ACC oxidasa y ACC sintasa están representadas en Cicer arietinum por una familia multigénica. El transcrito para la ACC oxidasa no es específico de semillas ya que se ha encontrado en otros órganos de la planta siendo su nivel de expresión diferente. La mayor abundancia de ARNm se encuentra en tallos, hojas maduras y flores. Durante la embriogénesis zigótica de semillas de garbanzo se desencadena la producción de etileno, estando implicadas tanto la ACC sintasa como la ACC oxidasa. Sin embargo, el nivel de expresión de ambos genes permanece prácticamente inalterado a lo largo del proceso embriogénico, lo que sugiere que la inducción de ambas enzimas es a nivel