Clonación molecular y secuencia nucleotídica de un gen de saccharomyces cerevisiae capaz de complementar la mutación autolítica lyt2-1 y que codifica para una proteinquinasa

Abstract

TRAS CARACTERIZAR UNA MUTACION AUTOLITICA TERMOSENSIBLE (LYT2-1) DE S. CEREVISIAE, SE CLONO UN FRAGMENTO DE DNA (A PARTIR DE UNA GENOTECA GENOMICA LIGADA A UN VECTOR MULTICOPIA) CAPAZ DE COMPLEMENTAR DICHA MUTACION. MEDIANTE HIBRIDACION DNA-DNA SE VERIFICO QUE DICHO FRAGMENTO PERTENECE AL GENOMA DE ESTA LEVADURA. ASIMISMO SE AVERIGUO QUE DICHAS SECUENCIAS GENICAS SE ENCUENTRAN LOCALIZADAS EN EL CROMOSOMA V DE S. CEREVISIAE. SE REDUJO EL TAMAÑO INICIAL DEL FRAGMENTO MEDIANTE SUBCLONACIONES HASTA 2,2 KB. SE COMPROBO QUE LAS SECUENCIAS GENICAS PORTADAS EN EL FRAGMENTO, NO COMPLEMENTAN EL FENOTIPO AUTOLITICO CUANDO VAN INCLUIDAS EN VECTORES MONOCOPIA O SON INTEGRADAS EN EL CROMOSOMA. LA SECUENCIACION DE ESTE INSERTO DE DNA DIO LUGAR A UN UNICO MARCO ABIERTO DE LECTURA DE 1.452 NUCLEOTIDOS, LO QUE DETERMINA UNA PROTEINA DE 484 AMINOACIDOS QUE HA SIDO IDENTIFICADA COMO UNA PROTEIN-QUINASA".