Comportamiento de las células microgliales en cultivos organotípicos de retina en desarrollo

Resumen

La retina es una región bien delimitada del SNC con una organización citoarquitectónica en capas especialmente favorable para la preparación de cultivos organotípicos sin realizar rebanadas y para el estudio de las células microgliales (Chavarría et al., 2007; Cirillo et al., 2001; Díaz et al., 1999; Franke et al., 2006; Sanders et al., 2005). Además, la retina de aves carece de vasos sanguíneos a diferencia de la de mamíferos, lo que facilita la visualización de las células microgliales. El presente estudio demuestra que a pesar de las diferencias observadas en la densidad celular y grado de ramificación, hay cierta semejanza entre el patrón cronológico de migración y ramificación de las células microgliales en cultivo de explantes de retina embrionaria de codorniz (ERECs) de E9 cultivados hasta 7 div y el observado durante el desarrollo de retinas in situ de edades equivalentes. Por lo tanto, el modelo experimental descrito en este estudio se puede usar como herramienta para aclarar los mecanismos moleculares implicados en la migración y diferenciación de la microglía en retinas en desarrollo. Además, nuestro estudio también demuestra que, en ERECs de E7 cultivados in vitro en combinación con el marcaje vital de las células microgliales mediante inmunofluorescencia directa, las células microgliales entran en la retina desde la CNO/BP y posteriormente colonizan la superficie vítrea de la misma mediante un mecanismo de migración exploratoria y estocástica, junto con la proliferación de las células que migran en territorios poco poblados. El hecho de que los explantes de retina aislados sean colonizados por células microgliales de forma semejante a lo que sucede en la retina in situ sugiere que la migración tangencial de las mismas está regulada por factores intrínsecos. Nuestros resultados también apoyan la participación de factores microambientales, tales como la inhibición por contacto con células vecinas y la topografía orientada del sustrato, en el proceso de diseminación de las células microgliales dentro de la retina. La inhibición por contacto parece ser un mecanismo decisivo para conseguir que toda la retina sea colonizada uniformemente por las células microgliales. Finalmente, nuestro estudio avala que la migración microglial en ERECs no tratados con diferentes inhibidores farmacológicos de moléculas implicadas en la migración de diferentes tipos celulares, es dependiente de MMPs, Src y calpaínas, como es típico del modo de migración mesenquimal, y es también dependiente de ROCK, que es característico del modo de migración ameboide. Esto sugiere que las células microgliales avanzan en la retina siguiendo un mecanismo de migración mixto, con ciertas características propias del tipo mesenquimal y otras peculiares del tipo ameboide, que también ha sido descrito en algunos tipos celulares (Friedl, 2004; Sahai & Marshall, 2003). Otra posible explicación a nuestros resultados es que las células microgliales que migran tangencialmente en los ERECs podrían alternar los dos tipos de migración, mesenquimal y ameboide, utilizando en cada momento el modo más favorable para conseguir avanzar en cada región de un sustrato heterogéneo. Según esta hipótesis, durante el proceso de colonización microglial de la retina, siempre habría una parte de células en fase migratoria mesenquimal y otra parte en fase ameboide, de manera que la inhibición de factores que intervienen en uno u otro tipo de migración siempre afectaría al conjunto de células microgliales migratorias.