Identificación y regulación del gen estructural de la aminopeptidasa i de saccharomyces cerevisiae

Resumen

EN ESTE TRABAJO SE HA PROCEDIDO A IDENTIFICAR Y CARACTERIZAR AL GEN ESTRUCTURAL DE LA AMINOPEPTIDASA YSCI, CON EL FIN DE ESTUDIAR LOS MECANISMOS DE REGULACION A QUE ESTA SUJETA SU EXPRESION Y PODER ESTABLECER JUNTO CON LOS DATOS DESCRITOS ACERCA DEL RESTO DE LAS PROTEASAS VACUOLARES, SI RESPONDE A UN PATRON GENERAL DE REGULACION O BIEN PRESENTA CARACTERISTICAS DIFERENCIALES. EL AISLAMIENTO DEL GEN SE LLEVO A CABO POR COMPLEMENTACION DE UNA CEPA MUTANTE AL TRANSFORMARLA CON UNA GENOTECA DE S. CEREVISIAE, IDENTIFICANDO LOS CLONES POSITIVOS MEDIANTE UN ENSAYO DE ACTIVIDAD EN PLACA QUE USA COMO SUSTRATO AL DIPEPTIDO BLOQUEADO LEU-GLY-NH2. TRAS EL ANALISIS DE LOS PLASMIDOS RECOMBINANTES SE IDENTIFICO UN FRAGMENTO BGIII-SPHI DE 3.5 KB QUE CONTENIA AL GEN APE1, CUYA INTEGRACION PERMITIO COMPROBAR QUE APARECIA EN UNA SOLA COPIA EN EL GENOMA DE LA LEVADURA. SU SECUENCIACION MOSTRO QUE SU REGION CODIFICADORA CORRESPONDE A 1542 NUCLEOTIDOS LO QUE SUPONE UN POLIPEPTIDO DE 514 AMINOACIDOS Y 57003 DA. ESTOS DATOS INDICAN QUE ESTE ENZIMA SE SINTETIZA EN FORMA ZIMOGENICA QUE HA DE SER PROCESADA POST-TRADUCCIONALMENTE. A DIFERENCIA DEL RESTO DE LAS PROTEASAS VACUOLARES, CARECE DEL PEPTIDO SEÑAL HIDROFOBICO NECESARIO PARA INTERNALIZARSE EN EL RETICULO ENDOPLASMICO E INICIAR SU RUTA DE TRANSPORTE HACIA LA VACUOLA. POR OTRA PARTE, SU EXTREMO AMINOTERMINAL PARECE ADOPTAR UNA ESTRUCTURA EN HELICE ALFA PROPIA DE PROTEINAS MITOCONDRIALES QUE SE SINTETIZAN EN RIBOSOMAS LIBRES. EL ARN MENSAJERO POSEE UN TAMAÑO DE 1.75 KB. LA EXPRESION DEL GEN APE1 ESTA SOMETIDA A CONTROL TRANSCRIPCIONAL EJERCIDO POR LA CONCENTRACION DE GLUCOSA EXISTENTE EN EL MEDIO DE CULTIVO. Y DEL MISMO MODO, EXISTE UN SEGUNDO PUNTO DE REGULACION A NIVEL POST-TRANSCRIPCIONAL, PROBABLEMENTE REALIZADO POR LA PROTEINASA YSCA ENCARGADA DE LA MADURACION DE LA FORMA ZIMOGENICA DE LA AMINOPEPTIDASA YSCI.