Procesos que regulan la transcripción en eucariotas

Resumen

[ES] La progresión de la RNA polimerasa II (RNAPII) a lo largo del ciclo de transcripción así como la coordinación entre las distintas etapas, y de éstas con otros procesos nucleares, está altamente regulada por la fosforilación del dominio C-terminal (CTD) de la propia subunidad mayor de la polimerasa, Rpb1, pero también por la acción de numerosas proteínas, que reciben de forma genérica el nombre de factores de transcripción. Uno de estos factores es la proteína Sub1 de Saccharomyces cerevisiae. Sub1 es un coactivador transcripcional, homólogo al factor humano PC4, al que se ha implicado en varios procesos de la biogénesis de los RNA mensajeros (mRNAs), como son la iniciación de la transcripción y el procesamiento en 3 de los pre-mRNAs (revisado en Conesa and Acker, 2010). En este trabajo de tesis doctoral se ha demostrado que el factor de transcripción Sub1 actúa como un regulador general de la fosforilación de la RNAPII a lo largo de todo el ciclo transcripcional. Así, encontramos que SUB1 interacciona genéticamente con los genes que codifican para todas las CTD-quinasas descritas hasta el momento, SRB10, KIN28, CTK1 y BUR1. Del mismo modo, Sub1 afecta de forma diferencial a la actividad catalítica y al reclutamiento de estas enzimas (García et al., 2010; Calvo and García, 2012). Además, se han mostrado evidencias de que Sub1 podría modular el estatus de fosforilación del CTD a través de su asociación con las subunidades de la RNAPII, Rpb4/Rpb7. Ambas subunidades constituyen in vivo un dímero funcional que ha sido relacionado en trabajos previos con las modificaciones post-traduccionales del CTD (revisado en Sharma and Kumari, 2012). Por otro lado, gracias al desarrollo de este trabajo de tesis se ha encontrado también una posible función de Sub1 en la regulación de la elongación de la transcripción, independiente de su función en la fosforilación de la RNAPII. Así, mediante distintos ensayos bioquímicos, se ha demostrado que SUB1 interacciona genéticamente con el gen codificante del factor de elongación esencial y evolutivamente conservado, Spt5, y que Sub1 influye en la fosforilación de este factor por la quinasa Bur1. Además se ha demostrado que Sub1 y Spt5 co-purifican en el mismo complejo, probablemente durante la elongación temprana, y que Sub1 influye en la interacción Spt5-Rpb1. Sub1 influye también en la elongación de genes de expresión constitutiva e inducible, y se asocia a las regiones codificantes de los genes de manera dependiente de la transcripción. En conjunto, estos resultados indican que Sub1 es un factor de transcripción que se asocia con Spt5, influye en la interacción y los niveles del complejo Spt5-Rpb1 y consecuentemente en la tasa de elongación (Garcia et al., 2012)