Caracterización in vivo e in vitro de progenitores neuronales en la retina de peces teleósteos

Resumen

Estudios previos han demostrado que la retina de carpín es capaz de crecer durante toda la vida adulta del animal. Este crecimiento se produce a partir de células madre localizadas en la zona periférica germinal (ZPG). Esta población de retinoblastos es capaz de generar todos los tipos celulares de la retina, a excepción de los bastones. Los bastones provienen de una población de células progenitoras denominada linaje de bastón. Por todo ello, el carpín es por tanto un modelo ideal para caracterizar el comportamiento de las células progenitoras retinianas en una retina adulta, en el que también podremos estudiar la generación y maduración de bastones. Los objetivos del presente trabajo fueron: 1- Identificar y localizar los progenitores retinianos en la retina adulta de carpín. 2- Caracterizar el patrón de expresión de diferentes marcadores moleculares en las células progenitoras. 3- Diseñar un cultivo primario de progenitores de bastón. Para identificar los progenitores retinianos utilizamos como marcador de proliferación la bromodesoxiuridina (BrdU). Con este protocolo conseguimos identificar tanto las células madre de la ZPG como las células pertenecientes al linaje de bastón. El siguiente paso fue analizar el proceso de migración y diferenciación de los progenitores retinianos mediante el uso de marcadores como: Pax6, Prox1, Islet1, NeuroD, Nestina, Notch1 y CD133. Los resultados obtenidos demostraron que los procesos de migración y de diferenciación están íntimamente relacionados, ya que a medida que los progenitores van migrando hacia capas esclerales de la retina se determinan exclusivamente a bastones. Utilizando el medio de cultivo Neurobasal A suplementado con factores de crecimiento hemos conseguido establecer un cultivo estable de progenitores de bastón. La puesta a punto de este protocolo nos permitirá conocer su potencialidad in vitro. Todos estos datos permitirán profundizar en el diseño de terapias celulares más eficaces orientadas a reponer las células que se han perdido en una retina en degeneración.