Clonación y expresión de genes implicados en la biosíntesis de poliquétidos de streptomyces halstedii

Résumé

ESTA TESIS DOCTORAL ESTUDIO UN FRAGMENTO DE ADN PSTI DE 2,6KB QUE HIBRIDA ESPECIFICAMENTE CON ACTI. EN PRIMER LUGAR, SE SECUENCIO Y CARACTERIZO, REVELANDOSE LA EXISTENCIA DE DOS PAUTAS ABIERTAS DE LECTURA COMPLETAS (ORFB Y ORF1) Y OTRAS DOS INCOMPLETAS (ORFA Y ORF2). LAS ORF1 Y ORF2 FORMAN UNA -CETOACIL SINTETASA HETERODIMERICA, CUYO CENTRO ACTIVO ES UN RESIDUO DE CISTEINA. LAS ORFB Y ORFA TIENEN FUNCION DESCONOCIDA HASTA EL MOMENTO. EN SEGUNDO LUGAR, SE LLEVO A CABO LA EXPRESION OBTENIDO SOLO ERA DETECTADO MEDIANTE EL MARCAJE UTILIZANDO S-METIONINA. AL MODIFICAR LOS TRIPLETES 2 Y 6, PARA ADECUARLOS A UN MEJOR USO DE CODONES PARA E.COLI SE INCREMENTO EL NIVEL DE EXPRESION EN AMBOS CASOS. EN TERCER LUGAR, SE LLEVO A CABO UN EXPERIMENTO DE DISRRUPCION GENICA EN OTRA ZONA DEL ADN DE, S.HALSTEDII, A LA IZQUIERDA DEL FRAGMENTO ESTUDIADO, DEMOSTRANDOSE QUE DICHO FRAGMENTO TAMBIEN PARTICIPA EN EL PROCESO DE BIOSINTESIS DEL PIGMENTO DE LA ESPORA DE S.HALSTEDII Y CUYA ALTERACION DA LUGAR A UN FENOTIPO LILA.