Regulación de la dormición de simillas de haya (fagus sylvatica l.)aislamiento y caracterización de clones implicados en la biosíntesis de etileno y giberelinas y en las respuestas a estas hormonas

Resumen

El haya (Fagus sylvatica L.), ha sido la especie forestal utilizada en este trabajo como sistema modelo en el estudio de la dormición de simillas. Las semillas de haya presentan una dormición endógena que puede ser eliminada por estratificación a 4ºC o mediante la aplicación de giberelinas o ethephon (compuesto que libera etileno en solución). Debido a la importancia de estas hormonas en la regulación de este proceso, nuestro principal objetivo ha sido encontrar los clones implicados en su biosíntesis y señalización, así como analizar su regulación intentando demostrar la relación entre etileno y giberelinas. Las enzimas implicadas en la biosíntesis de estas hormonas, ACC sintasa (ACS), ACC oxidasa (ACO) y GA 20-oxidasa, han sido caracterizadas en diferentes especies vegetales, aislando fragmentos con una elevada similitud en haya mediante la utilización de oligonucleótidos degenerados. FsACS1, de Fagus sylvatica L. ACS1, presenta una expresión semejante en todos los tratamientos utilizados sugiriendo, conjuntamente con las medidas preliminares de ACC y de etileno, una regulación de tipo posttranscripcional. Por el contrario, la expresión de FsACO1, que aumenta en los tratamientos que rompen la dormición, y las medidas de actividad ACC oxidasa en las semillas indican una regulación de tipo transcripcional. FsGA20ox1, semejante a GA 20-oxidasa, presenta una clara regulación "feedback" en su expresión, observándose también una disminución en la expresión tras la aplicación de ethephon. Tanto FsACO1 como FsGA20ox1 fueron expresados como proteínas de fusión comprobándose posteriormente que codifican para proteínas funcionales. El estudio de la ruta de señalización del etileno se realizó aislando alguno de sus componentes como un receptor (FsERS1) o una proteína de unión a elementos ERE (FsEREBP1), aumentando en ambos casos su expresión por ethephon. La expresión de FsERS1 está relacionada co