Diagnóstico, caracterización y epidemiología de clavibacter michiganensis subsp. Sepedonicus, bacteria causante de la podredumbre anular a la plata

Resumen

Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus es la bacteria causante de la podredumbre anular de la patata, enfermedad de cuarentena en la Unión Europea. Los objetivos de este trabajo han sido detectar la enfermedad en España, principalmente en Castilla y León; comparar la sensibilidad de distintas técnicas de diagnóstico; realizar una caracterización fisiológica, bioquímica y molecular de cepas de distintos orígenes geográficos; y evaluar la supervivencia de dicha bacteria en las condiciones ambientales de Castilla y León. Se analizaron 3574 muestras de patata mediante inmunofluorescencia indirecta, aislamiento en medio de cultivo, inoculación en berenjena y pruebas de identificación. Se confirmó la presencia de la bacteria en 32 casos, 28 de ellos con origen en Castilla y León. Se determinó la sensibilidad de distintas técnicas de diagnóstico, comprobándose que la inoculación en berenjena era la más sensible, seguida de PCR, inmunofluorescencia y aislamiento en medio de cultivo, estableciéndose unas recomendaciones para mejorar la metodología oficial de análisis. En la caracterización fisiológica, bioquímica y molecular, se estudió la utilización de fuentes de carbono, la producción de enzimas, los perfiles electroforéticos de LMW-RNA y el ADN localizado entre secuencias repetidas del genoma (BOX-PCR). Con todas ellas se ha comprobado que existe una gran homogeneidad intraespecífica y que estas técnicas podrían utilizarse para una identificación rápida de la bacteria. Se detectó actividad celulásica y alfa-amilásica in vivo, y celulásica in vitro. El análisis del perfil isoenzimático de celulasas, reveló la existencia de cuatro isoenzimas diferentes. La bacteria ha sido capaz de sobrevivir en el suelo al menos durante una campaña, manteniendo su capacidad infectiva. Los rebrotes de un cultivo de patata infectado han actuado como reservorio de la enfermedad, no así la remolacha azucare