Función y regulación de las gtpasas rho1p y rho2p en schizosaccharomyces pombe

Resumen

La finalidad de esta Tesis ha sido el estudio del papel que juegan las GTPasas de la familia Rho en la biosíntesis de la pared de Schizosaccharomyces pombe. Estas proteínas están conservadas evolutivamente y son necesarias para la organización del citoesqueleto de actina que, a su vez, es esencial para la biosíntesis de la pared celular. Hemos estudiado la ruta de señalización de Rho1p y Rho2p, y su interacción con otras proteínas implicadas en la biosíntesis de la pared celular de S.pombe como las quinasas Pck1p y Pck2p. Las proteínas de la familia Rho alternan entre una forma activa. Cuando están unidas a GTP, y una forma inactiva, cuando están unidas a GDP. La transición entre una conformación u otra es negativamente modulada por proteínas activadoras de la capacidad GTPásica (GAPs), que favorecen la hidrólisis del GTP a GDP, y juegan un papel fundamental en la especificidad de las funciones de Rho. También hemos descrito en este trabajo el gen denominado gpr1+ que codifica una proteína GAP de Rho1p. La sobreexpresión de gpr1+ causa una lisis celular rápida, y una disminución del 40% de la actividad (1,3)beta-D glucán sintasa, respecto de una estirpe silvestre. Por el contrario, células carentes del gen gpr1+ son viables y muestran un ligero fenotipo morfológico a 37º. La actividad (1,3)beta-D glucán sintasa de estas células está considerablemente incrementada. La sobreexpresión de rho1+ en células gpr1 es letal y cuasa un incremento de la actividad (1,3)beta-D-glucán sintasa mayor que el detectado en células silvestres que sobreexpresan rho1+. Gpr1p co-inmunoprecipita con Rho1p, y muestra actividad específica GAP sobre Rho1p tanto in vitro como in vivo. Grp1p participa en la regulación de la estabilidad de las proteínas quinasas Pck1p y Pck2p mediada por Rho1p. También juega un papel importante en la regulación del citoesqueleto de actina. La eliminación de los primeros 25 aminoácidos de la