Clonacion y caracterizacion de receptores opioides en el pez cebra (danio rerio)

Resumen

Los receptores opioides son las dianas endógenas de las sustancias opiáceas y de los péptidos opioides y han sido ampliamente estudiados en mamíferos, dada su evidente utilidad terapéutica en el control del dolor. Sin embargo, su presencia no ha sido totalmente establecida en vertebrados inferiores, aunque existen datos que apuntan a su existencia incluso en invertebrados. Por ello, como objetivo de este trabajo se propuso caracterizar por técnicas farmacológicas y moleculares los posibles receptores opioides en un teleósteo, el pez cebra (Danio rerio). Como resultado de este trabajo se han identificado dos genes con alta homología con los receptores opioides de mamíferos ZFOR1 presenta un 66% de identidad con el receptor opioide delta. La estructura genómica de este gen es muy similar a la de los receptores opioides delta de roedor y humano, con uniones exón-intrón que se han conservado filogenéticamente. La transfección de su cDNA en una línea celular permitió la caracterización de sus propiedades farmacológicas, confirmando su naturaleza como receptor ipioide, aunque su clasificación dentro de los tipos tradicionalmente considerados no ha sido totalmente establecida. Se identificó un segundo gen, ZFOR2, que presenta un 74% de homología con el receptor opioide mu de mamíferos y cuya estructura genómica es muy similar a la de éstos, aunque a diferencia de los receptores opioide mu de mamíferos ZFOR2 carace del cuarto exón, que se ha implicado en procesos regulatorios. La expresión de estos dos genes se ha estudiado mediante hibridación in situ en el sistema nervioso del pez cebra, observando patrones de expresión ampliamente solapantes, aunque con zonas de expresión diferencial. En general, la expresión de estos genes se puede correlacionar con la observada para los distintos receptores opioides en el cerebro de mamíferos. Por último, se analizaron los sitios de unión para sustanc