Clonación y caracterización del receptor oral en pez cebra (danio rerio)

Resumen

El dolor es un grave problema que afecta a la humanidad, se considera como una mecanismo de alarma a través del cual un individuo reconoce un daño en la integridad física de su organismo. El sistema opioide, tanto los receptores opioides como sus ligandos, intervienen en la modulación del dolor. La clonación de los receptores opioides ha permitido el desarrollo de nuevos fármacos que intervengan en la analgesia. La clonación de un nuevo receptor de la familia opioide, ORL1, así como su ligando, nociceptina u orfanina FQ, han abierto un nuevo campo para el estudio y desarrollo de nuevos compuestos que puedan ser utilizados en la terapéutica del dolor. Un pez cebra ha sido utilizado como modelo para el estudio de enfermedades en el hombre. Hasta el momento se han clonado cuatro tipos de receptores tipo opioide en este modelo experimental (ZFOR1, ZFOR2, ZFOR3 y ZFOR4). En este trabajo nos propusimos clonar el receptor homologo al receptor ORL1 de mamíferos en el pez cebra. Como resultado de este trabajo hemos clonado un nuevo receptor en el pez cebra denominado ZFORL. Este nuevo receptor presenta una alta homología con los receptores tipo ORL de mamíferos, cerca del 60%, y con los receptores opioides alrededor del 50%. Los estudios de expresión de este receptor dentro del sistema nervioso del pez cebra muestran una amplia expresión a lo largo del sistema nervioso del pez cebra y, que además difiere de los clonados en el pez cebra y presenta algunas diferencias con los clonados en mamíferos, principalmente en el cerebelo. La transfección de su cDNA en una línea celular permitió la caracterización de sus propiedades farmacológicas, confirmando una unión específica y saturable, y con un solo sitio de unión del ligando endógeno Nociceptina (KD=0.36nM; BMAX=120.6fmol/mg proteína). Estudios de desplazamiento revelaron que el ligando opioide endógeno dinorfina A presentaba una mayor afinidad por el receptor que