Purificacion y caracterizacion de las beta-glucanasas extracelulares de kluyveromyces lactis (syn. K. Phaseolosporus)

Resumen

El trabajo recogido en esta memoria se ha basado fundamentalmente en el estudio de la naturaleza glicoproteica de las glucanasas secretadas por la levadura kluyveromyces lactis (syn. K. Phaseolosporus). La glucanasa i purificada a partir del sobrenadante de cultivo de celulas de k. Lactis, caracterizada como una endo (1 3) glucanasa (ec 3.2.1.39), es una glicoproteina acida de elevado peso molecular con un gran contenido en carbohidrato constituido mayoritariamente por restos de manosa. La presencia de una forma subglicosilada de la glucanasa i en el sobrenadante de cultivo de celulas de k. Lactis incubadas en presencia de tunicamicina, asi como que este enzima sea sensible a la accion de la endoglicosidasa h, indican que esta glicoproteina posee cadenas de carbohidrato unidas n glicosidicamente a la fraccion proteica. La glucanasa iii y glucanasa iv purificadas a partir del sobrenadante de cultivo de celulas de k. Lactis y caracterizadas como exo (1 3) glucanasas (ec 3.2.1.58) inespecificas capaces de catalizar la hidrolisis de los enlaces (1 6) glucosidicos son glicoproteinas acidas cuya porcion glicosidica esta constituida por unidades de glucosa, manosa y galactosa. Ambos enzimas son resistentes a la accion de la tunicamicina y endoglicosidasa h, lo que hace suponer que no poseen cadenas de carbohidrato unidas n glicosidicamente a la fraccion proteica. Tanto la glucanasa i como la glucanasa iii y glucanasa iv liberan carbohidrato al someterlas a la reaccion de eliminacion, resultado que demuestra la presencia de enlaces 0 glicosidicos en estas moleculas. La unica presencia de enlaces 0 glicosidicos en la glucanasa iii y glucanasa iv de k. Lactis hace de estos enzimas el material idoneo para estudiar la biosintesis y funcion de este tipo de carbohidrato en las glicoproteinas de levaduras.