Estudio de la produccion de enzimas celuloliticos y pectinoliticos por las bacterias del genero rhizobium

Laburpena

El mecanismo de penetracion de rhizobium en los pelos radiclaes de su leguminosa huesped durante las primeras etapas del establecimiento de la relacion simbiotica no es todavia conocido, aunque se han propuesto varias hipotesis al respecto. La mas apoyada postula la implicacion directa de enzimas celuloliticos y pectinoliticos en el proceso. En este trabajo de investigacion se han optimizado las tecnicas que han permitido el estudio de la produccion de celulasas y pectinasas por rhizobium a pesar de la inherente baja actividad de estos enzimas en este caso. Las tecnicas utilizadas fueron: difusion radial en placa con gel de agarosa, valoracion de azucares reductores con acido bicinconinico (bca), viscosimetria y electroforesis e isoelectroenfoque analiticos. La produccion de enzimas celuloliticos y pectinoliticos es un fenomeno general entre las diversas especies aunque el perfil de isoenzimas varia entre especies y cepas. Por su parte, la produccion de poligalacturonasas solo parece general entre las diversas cepas de r. Leguminosarum bv. Trifolii. Tanto unos como otros enzimas estan asociados a las celulas, pues su actividad nunca fue detectada en el sobrenadante de cultivo, y su sintesis no es inducida por los sustratos polisacaridicos respectivos ni por la correspondiente flavona inductora de los genes de nodulacion. Centrando la investigacion en la cepa r. Leguminosarum bv. Trifolii anu843, se demostro que produce dos endoglucanasas (celulasas c1 y c2) y una endo poligalacturonasa. La poligalacturonasa y la celulasa c1 estan codificadas por genes localizados en el plasmido simbiotico de esta bacteria pero fuera de la region de 14 kb constituida por los genes de nodulacion. El determinante genico de la celulasa c2 es de localizacion cromosomica o se ubica en alguno de los 4 plasmidos cripticos detectados en esta cepa. Mediante cromatografias sucesivas de intercambio anionico, filtracion molecular e interaccion hidrofobic