Clonacion y secuenciacion del gen aspnd1 de aspergillus nidulans. Utilidad del antigeno recombinante aspnd1r en el inmunodiagnostico del aspergiloma pulmonar

Abstract

Entre las enfermedades fungicas, las aspergilosis figuran entre las que han experimentado la mayor tasa de incremento en los ultimos años, particularmente en los ambientes hospitalarios. Se ha constatado repetidamente que el principal problema que presentan este grupo de patogenias lo constituye la dificultad de establecer un diagnostico temprano y fiable (1). Por esta razon, se ha analizado la posibilidad de emplear a aspergillus nidulans como fuente de antigenos de interes en el inmunodiagnostico de las aspergilosis y estudiado en detalle uno de los antigenos que mas repetitivamente es reconocido por los sueros de pacientes, el antigeno aspnd1. Dicho antigeno presenta reaccion con el 90,5% de 21 sueros de pacientes con aspergiloma pulmonar y no con sueros controles de individuos sanos. Asi, a. Nidulans pede considerarse tras su crecimiento en cda como una fuente valida para la obtencion de aspnd1. Este antigeno es una glicoproteina compuesta por 261 aminoacidos que, precedidos por un peptido señal formado por 16 aminoacidos, lleva unidas 4 cadenas n-oligosacaridicas. Se ha demostrado que los sueros aspnd1. La masa molecular y punto isoelectrico calculados a partir de su secuencia de aminoacidos son 30,6 kda y 4,24 respectivamente. La region codificante de su gen esta formada por 931 pares de bases, se halla interrumpida por dos intrones y sus caracteristicas corresponden con las que suelen presentar los genes de hongos filamentosos. Se ha comprobado que aspnd1 presenta un 53,1% de identidad con un antigeno (asp f ii) de a. Fumigatus, el agente etiologico mas habitual, lo que confirmo el interes de emplear a a. Nidulans como fuente de antigenos y particularmente de aspnd1. La clonacion de su adnc es un vector de expresion (pgstag) y su sobreexpresion en e. Coli, permitio la obtencion de este antigeno en grandes cantidades y en las condiciones optimas para ser ensayado mediante inmunotransferencia frente a los sueros de pa