Aplicacion de la reaccion en cadena de la polimerasa (pcr) en el diagnostico de infecciones respiratorias por mycobacterium tuberculosis y otras micobacterias"

Abstract

La tuberculosis sigue planteando importantes problemas diagnosticos. En un intento de obviar las carencias de las tecnicas diagnosticas habituales se probo la reaccion en cadena de la polimerasa (pcr). El trabajo se realizo en dos fases: estandarizacion y aplicacion clinica sobre 500 muestras procedentes de 500 pacientes. Tras analizar los resultados de la fase de estandarizacion, las condiciones de la reaccion quedaron establecidas de la siguiente forma: 10mm tris-c1hph 8.3, 50 mm kc1, 1,5mm mgc12, gelatina 0.01% taq polimerasa 1u/100ul, iniciadores 25pmol de cada, dntps 0,25 mm, sometido a 35 ciclos de desnaturalizacion 94grados c 15'apareamientos 68grados c 15' y extension 72grados c 15'. Sobre muestra clinica se detecto genoma de m. Tuberculosis en 62 pacientes, 33 de los cuales tenian confirmacion microbiologica. En el resto salvo 4 existia justificacion clinica para asumir este resultado. Se detectan inhibidores en 16 muestras pertenecientes a pacientes inmunocompetentes con diagnostico de enfermedad. En pacientes vih+ el rendimiento de la reaccion fue mayor.