Analisis de la sensibilidad al cobre de yarrowia lipolytica. Clonacion y caracterizacion estructural de los genes crf1, mtp1 y mtp2

Résumé

La mayoria de las estirpes de yarrowia lipolytica son de fenotipo resistente al cobre (cupr), creciendo en presencia de 2.0 mm de cuso4, aunque las estirpes de fenotipo sensible (cups) no crecen a esa concentracion de metal. Las estirpes cupr en medio suplementado con metal expresan proteinas que acomplejan cobre y alcanzan la misma meseta en la fase estacionaria que en medio sin cobre adicional. La mutagenesis de una estirpe cupr permite aislar mutaciones que confieren fenotipo cups; la mutacion crfl-l complementada con una genoteca integrativa de una estirpe cupr conduce al aislamiento del gen crf1, que codifica una proteina con la region amino-terminal homologa al dominio de union a cobre y a dna de los activadores transcripcionales ace1 y amt1. La complementacion fisiologica de la mutacion cupla de una estirpe de saccharomyces cerevisiae potencialmente capaz de expresar constitutivamente la proteina crf1, con una genoteca de y. Lipolytica autorreplicativa en s. Cerevisiae permite aislar los genes mtp1 y mtp2 que presentan las regiones codificantes en hebras de polaridad opuesta, compartiendo la region hacia 5' y codifican proteinas semejantes entre si (51% de identidad) con caracteristicas de metalotioneinas.