Desarrollo y aplicación de un sistema de análisis de la respuesta inmunológica basado en la cuantificación simultánea (en la misma medición) de la secreción de citoquinas y caracterización de las células secretoras

Resumen

El estudio "ex vivo" de la respuesta inmunológica frente a un antígeno concreto (de origen tumoral o microbiano) se aborda en la actualidad mediante diferentes procedimientos analíticos que permiten la identificación, el recuento y caracterización de los linfocitos específicos de dicho antígeno. Estas técnicas pueden analizar a nivel fenotípico y molecular el receptor específico de antígeno de las células T (TCR), identificar los linfocitos T que se unen a un determinado complejo HLA-péptido antigénico o determinar la respuesta funcional de las células T tras cultivo "in vitro" con el antígeno. Sin embargo, ninguna de ellas permite caracterizar a los linfocitos T que responden de forma específica al antígeno y cuantificar simultáneamente las citoquinas que éstos liberan para lograr una respuesta coordinada y eficaz. En este trabajo doctoral se ha desarrollado y validado un método de evaluación de la respuesta inmunológica que permite identificar y caracterizar las células activadas productoras de citoquinas y que, simultáneamente, permite cuantificar las citoquinas secretadas al medio extracelular. Este nuevo método, desarrollado directamente en sangre periférica sometida a mínima manipulación para preservar las condiciones fisiológicas del medio, ha permitido detectar simultáneamente cambios cualitativos y cuantitativos de la respuesta inmunológica tanto frente a estímulos genéricos como antigénicos. La validación del método ha permitido monitorizar "in vitro" de forma rápida, objetiva y reproducible la respuesta celular T frente a antígenos víricos (citomegalovirus -CMV-) y frente a antígenos tumorales (inmunoglobulina (Ig) clonal en pacientes con mieloma múltiple -MM-). La caracterización del modelo de CMV nos ha permitido asimismo identificar ciertas asociaciones entre el haplotipo de donantes sanos seropositivos y clones de células T que responden específicamente a CMV con un determinado TCR-Vß. Por su parte, en el modelo de respuesta antitumoral, se ha evaluado la eficacia de vacunación con Ig clonal y células dendríticas alogénicas en pacientes con MM. Para poder completar en profundidad la caracterización molecular de las células T activadas, se ha desarrollado además un método que permita en un futuro la separación de células T específicas de antígeno a partir de muestras de gran volumen.