Estudios sobre los procesos de regulación de la biosíntesis y resistencia a puromicina en streptomyces alboniger

Zusammenfassung

El género Streptomyces ha sido estudiado por ser uno de los mayores productores de antibióticos. Streptomyces alboniger produce un antibiótico aminonucleosídico, puromicina, que inhibe la biosíntesis de proteínas, tanto en organismos eucariotas como procariotas. El "cluster" de biosíntesis de puromicina ha sido aislado previamente (Lacalle y col., 1992) y se han estudiado y caracterizado diferentes genes del "cluster", sin embargo a ninguno de ellos se le ha podido asociar una función reguladora. En este trabajo, nos hemos centrado en el estudio de dos genes. Uno de ellos, bldA, implicado en regulación traduccional, codifica un ARN de transferencia que incorpora Leu y reconoce el codón TTA, poco común en un organismo como Streptomyces con un alto contenido en G+C en su genoma. Este codón se encuentra presente en dos genes del "cluster" pur (pur10 y pur6). El segundo gen estudiado, pur8, es el último gen del "cluster". Codifica una proteína transmembrana implicada en resistencia. Se ha aislado el gen bldA de S. alboniger, con identidad con otros genes bldA aislados de Streptomyces coelicolor, Streptomyces griseus, Streptomyces clavuligerus y Streptomyces avermitilis. La expresión del gen bldA en mocopia y alto número de copias, ha sido capaz de complementar el mutante Streptomyces lividans J1725 (bldA-), restaurando el fenotipo silvestre de esporulación. Además, la producción de puromicina no se vio afectada por la expresión del gen bldA en alto número de copias en el organismo productor. El codón TTA ha sido reemplazado por el codón TTG (mutación silenciosa) en los genes pur10 y pur6 del "clúster" de biosíntesis de puromicina. Esto nos permitirá conocer más acerca de la relación existente entre el gen bldA, la transcripción del "cluster" pur y la producción de puromicina, todos ellos con una expresión temporal, siendo máxima en la fase estacionaria. Hasta la fecha, ha sido imposible la obtención d