Transplante funcional de Receptores nicotínicos y canales de cloruro C1C-0 de Torpedo Marmorata a la membrana de ovocitos de Xenopus laevisEstudio de los factores que intervienen en el proceso

Resumen

Los ovocitos de Xenopus laevis han sido ampliamente utilizados para el estudio de la expresión de proteínas exógenas a partir de la microinyección de su mRNA. Esta técnica tiene algunas limitaciones ya que no en todos los casos los ovocitos pueden traducir fielmente el mRNA inyectado (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 8468-8472; 1995). Por ello, el grupo de Morales y cols. propusieron una nueva metodología alternativa basada en el transplante funcional al ovocito de la proteína purificada y reconstituida en un entorno lipídico determinado. Mediante esta técnica comprobaron que el receptor nicotínico de acetilcolina se incorpora funcionalmente en la membrana del ovocito. Utilizando esta metodología se ha estudiado la incorporación funcional del canal de cloruro voltaje dependiente ClC-O de Torpedo marmorata. Se ha comprobado que las características electrofisiológicas (dependencia de voltaje, permeabilidad, efecto de distintos bloqueantes) de la proteína transplantada coinciden con las previamente descritas en modelos de bicapa. Dado que el canal ClC-O es una proteína con características muy diferentes al receptor nicotínico y también se incorpora funcionalmente a la membrana del ovocito, se concluye que esta técnica puede hacerse extensiva a otras proteínas de membrana reconstituidas en vesículas lipídicas. En otra serie de experimentos se han estudiado diferentes factores que pueden estar afectando al proceso de fusión entre la vesícula lipoproteíca y la membrana del ovocito. Entre los factores que se han estudiado están el calcio, el medio lipídico utilizado para la reconstitución y el procedimiento de homogeneización de la muestra antes de inyectarse en los ovocitos. El estudio de estos factores supone un mayor conocimiento de los mecanismos de fusión que subyacen al proceso de incorporación de la vesícula lipoproteíca con la membrana del ovocito.