Estudio y purificación de la enzima sialidasa de colon humano. Análisis de sialoglicoconjugados en adenocarcinoma colorrectal

Resumen

Mediante cromatografía a través de concanavalina A-sepharosa se separaron dos formas moleculares de la sialidasa colorrectal humana que difieren en su sensibilidad frente a distintos compuestos inorgánicos y orgáncios , en su masa molecular determinada mediante cromatografía de exclusión molecular y en sus capacidad para hidrolizar el sustrato sintético ácido 2'4-metilumbeliferil a-D-N-acetil-neuramínico (MU-NANA), y los sustratos naturales neuraminil-lactosa, fetuina y ganliósidos. Partiendo de una de las formas moleculares, se purificó 149 veces una sialidasa lisosómica de mucosa colorrectal humna que representa un porcentaje minoritario de la actividad sialidásica celular. Dicha sialidasa es activa frente al sustrato MU-NANA y frente a los sustratos naturales 3' neuraminil-lactosa y fetuina. Mediante el procedimiento cromatográfico empleado, se comprobó que al menos parte de la sialidasa lisosómica de mucosa colorrectal humana se encuentra asociada a la B-D-galactosidasa formando un complejo enximático. En pacientes con adneocarcinoma colorrectal se produce un incremento estadísticamente significativo de la actividad sialidásica del tumor respecto a la mucosa sana.Dicho incremento no se debe a alterciones en propiedades físcio-químicas o cinéticas de la enxima ni a la presencia de activadores en el tejido tumoral. Mediante estudios cuantitativos e inmunohistoqúmicos se comprobé que en el adenocarcinoma colorrectal se produce alteraciones en los patrones de sialilación con respecto a la mucosa sana. Asimismo, los niveles séricos de ácido siálico total y de ácido siálico ligado a glicoconjugados aumentan significativamente en pacientes con cáncer colorrectal con respecto a individuos sanos. Los datos de sensibilidad, especificidad, eficiencia diagnóstica y el valor del área bajo la curva de ROC indican que el ácido siálico sérico podría tener utilidad en el diagnóstico de pacientes con adenocarci