Piruvato quinasa de "Phycomyces blakesleeanus"purificación y estudio de las propiedades alostéricas

  1. VALLE FERNANDEZ M. PILAR DEL
Dirixida por:
  1. Félix Busto Ortiz Director

Universidade de defensa: Universidad de León

Ano de defensa: 1987

Tribunal:
  1. José María Macarulla Greoles Presidente/a
  2. Ángel Reglero Chillón Secretario/a
  3. José Cabo Soler Vogal
  4. José María Medina Jiménez Vogal
  5. Vicente Rubio Zamora Vogal

Tipo: Tese

Teseo: 14802 DIALNET

Resumo

Hemos purificado la piruvato quinasa de phycomyces hasta homogeneidad electroforetica obteniendose un rendimiento del 6% y una purificacion de 500 veces. Esta enzima a ph 7 5 en ausencia de efectores exhibe interacciones homotropicas positivas con el pep los centros de union para el pep son independientes de los centros de union para adp y mg elevado 2+. Con respecto aladp sigue una cinetica de michaelis-menten. Muestra requerimiento absoluto por el cation divalente mg elevado a 2+ para su actividad y presenta interacciones homotropicas positivas en la union del cation. La fbp (furctosa 1 6-bisfosfato) actua como un activador alosterico hetrotropico para la enzima de phycomyces transformando la cinetica sigmoide para el pep y mg elevado a 2+ en hiperbolica; con respecto al adp actua como un actividador que no afecta a la cinetica hiperbolica. La l-alanina se comporta como un inhibidor alosterico heterotropico que refuerza las interacciones cooperativas mostradas por el pep; por otra parte elimina las interacciones homotropicas positivas que presenta el mg elevado a 2+. El efecto del atp es similar al producido por la l-alanina es decir es un efector alosterico negativo que disminuye la afinidad de la enzima por el pep y mg elevado a 2+. Con respecto al adp se comporta como un inhibidor competitivo. Las propiedades cineticas de la enzima de phycomyces indican que es una enzima alostrica tipo k que se comporta de acuerdo al modelo concertado de monod wyman y changeux. El pep y la fbp presentan union exclusiva al estado conformacional r. La l-alanina muestra union exclusiva al estado conformacional t de la enzima. Existe un claroantagonismo entre pep y l-alanina asi como entre fbp y l-alanina.