Homeostasis de cationes en las levaduras saccharomyces cerevisiae y debaryomyces hansenii. Función de los genes sctrk12, dhppz1 y análisis de la respuesta a estrés oxidativo en d. Hansenii

Resumen

La homeostasis de cationes es un proceso fundamental para las células vivas. En este trabajo se han estudiado aspectos diferentes que participan en los procesos de homeostasis de cationes en levaduras. Utilizando como modelo la levadura Saccharomyces cerevisiae, hemos caracterizado el transporte de potasio en una cepa silvestre y en una cepa doble mutante trk1 trk2, carente de los principales sistemas de transporte de potasio. Esta parte de la tesis se ha realizado en el contexto de un proyecto de biología de sistemas, y uno de los primeros pasos para abordarlo fue el diseño de un medio de cultivo estandarizado, con concentraciones de K+ y Na+ muy bajas (15 mM y 1,3 mM respectivamente). En estas condiciones, se analizaron las características del transporte, la concentración interna del catión y el volumen celular. En este trabajo también hemos identificado, clonado y expresado el gen PPZ1 de la levadura Debaryomyces hansenii, una levadura halotolerante que ofrece ventajas para la identificación de nuevos factores genéticos implicados en los mecanismos de resistencia a sal. Al expresar el gen DhPPZ1 en una cepa de S. cerevisiae mutante en los genes PPZ1 y PPZ2, se observó como la cepa que expresaba DhPPZ1 mostraba una mayor sensibilidad a Na+, Li+, tetrametilamonio e higromicina B, a la vez que exhibía una mayor tolerancia a cafeína. Además, estas células presentaban un menor contenido de K+ respecto al control y por tanto un volumen celular también inferior. Finalmente, hemos completado un primer estudio sobre el estrés oxidativo en D. hansenii y se muestra por primera vez la naturaleza sensible de D. hansenii frente a sustancias como cloruro de cadmio (CdCl2), peróxido de hidrógeno (H2O2) y 1,4-ditiotreitol (DTT).