Mecanismo de depleción de glutatión y papel de la serín/treonín fosfatasa PP2A en la pancreatitis aguda.

Resumen

RESUMEN En la presente Tesis Doctoral se han estudiado los mecanismos implicados en la degradación de glutatión reducido (GSH) en los modelos in vivo de pancreatitis aguda (PA) necrótica inducida por infusión retrógrada de taurocolato sódico al 3,5% y de PA edematosa inducida por una dosis supramáxima de ceruleína. Se ha confirmado que en la PA necrótica se produce la depleción mantenida de GSH. El mecanismo de síntesis de la glutamato citeína ligasa (GCL), mediado por ERK 1/2 y el factor de transcripción C-MYC, aparece activado tanto en la PA edematosa como en la necrótica, sin embargo en la necrótica se produce un fallo del mecanismo originado por la activación de la ribonucleasa (RNasa) pancreática en el citosol de las células acinares responsable de la degradación del ARNm de la GCL. Además se ha profundizado en el mecanismo implicado en la degradación de GSH en las etapas tempranas de la PA, caracterizando la tasa de degradación de GSH y de formación de glutamato y cisteína en extractos citosólicos de páncreas de rata con PA necrótica. La degradación de GSH y la formación de cisteína y glutamato son prevenidas en presencia del inhibidor de serín peptidasas amino etil bencenil sulfonil fluoruro (AEBSF). También se ha realizado cromatografía de afinidad con columnas de retención de GSH (1) y de AEBSF-biotinilado (2) en extractos citosólicos de áncreas de ratas con PA necrótica identificando proteínas GSH transferasas (1) y Glutarredoxina (1) o Htra 3ª (2), RNasa pancreática (2), Tripsina (2), ARID 4D (Rbpl 1) (2) y Arginina: glicina amidino transferasa (2) como posibles enzimas implicadas en la degradación de GSH. Por otro lado, se han descartado la Tripsina, gamma-Glutamil transpeptidasa y Carboxipeptidasa B pancreática como posibles responsables de la hidrólisis del GSH. En cuanto a la cascada inflamatoria, se ha determinado que durante la PA se produce la disminución de las serín treonín fosfatasas PP2A, PP2B (calcineurina) y PP2C, 1 hora después de la inducción de la PA necrótica y de las tirosín fosfatasas citosólicas que podría favorecer el aumento de la fosforilación de las MAPK en la PA. En estudios in vitro, se ha estudiado la actividad de la PP2A en células AR42J incubadas con taurocolato al 0,3%. El taurocolato produce una disminución transitoria de la actividad PP2A indicando la implicación de la misma en fenómenos de señalización celular. Además la PTX es capaz de prevenir esa perdida de la actividad PP2A mediado por el AMPc. Por inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP) se ha comprobado que durante la PA se produce el reclutamiento de acetiltransferasas a los promotores de genes inflamatorios como egr-1, Inos-2, Icam-1 y TNF-alpha y que la PTX es capaz de bloquear la unión de las acetiltransferasas CBP y PCAF a dichos promotores. Además en algunos casosla PTX también promueve la unión del complejo deacetilasa mSIN3A/HDCA 1 a los promotores. __________________________________________________________________________________________________