Caracterización de los anticuerpos anti-micelio de candida albicans y biomarcadores para el diagnóstico de la candidiasis invasora

Resumen

El diagnóstico temprano de la candidiasis invasora (CI) continúa siendo un reto clínico. La detección de anticuerpos anti-micelio de Candida albicans (CAGTA) mediante inmunofluorescencia indirecta es una herramienta diagnóstica útil. Sin embargo, esta técnica no se puede automatizar, lo cual supone un problema para su estandarización. Con el fin de superar esta dificultad, en este trabajo se caracterizó el patrón de reconocimiento antigénico de los CAGTA y se desarrollaron nuevas pruebas serológicas de detección de anticuerpos contra algunos de dichos antígenos (ELISA y microarray).Los CAGTA reconocieron, entre otros, los siguientes antígenos presentes en extractos de pared de tubos germinales de C. albicans: metionina sintasa (Met6), enolasa (Eno1), alcohol deshidrogenasa (Adh1), inositol-3-fosfato-sintasa y proteína 14-3-3 (o Bmh1). Mediante inmunomicroscopía electrónica se pudo comprobar que los CAGTA reaccionaban con componentes de la superficie de los tubos germinales de C. albicans, sin embargo también reaccionaban con proteínas localizadas en capas internas de la pared de las blastosporas. La detección de anticuerpos anti-Met6, anti-Hwp1-N (hyphal wall protein) y anti-CWEno (enolasa purificada a partir de extractos de pared) mediante ELISA mostraron ser una buena herramienta diagnóstica en pacientes con CI debida a C. albicans. Por el contrario, los ensayos ELISA para la detección de anticuerpos anti-Eno1, anti-(Als3-N), anti-Adh1 y anti-(14-3-3), mostraron una utilidad diagnóstica limitada, con valores de sensibilidad moderados. Sin embargo, destacan por su alta especificidad y valor predictivo negativo, con índices superiores al 90%, lo cual es muy útil desde el punto de vista clínico para descartar la enfermedad. Todos los ensayos, en especial la ELISA anti-Hwp1-N, permitieron una detección precoz, siendo capaces de anticiparse en distinto grado al diagnóstico de la CI por hemocultivo, técnica actual de referencia. La combinación resultados obtenidos con diferentes ensayos ELISA mostró rendimientos mucho mejores que cuando se estudió cada antígeno por separado. Cabe destacar la combinación realizada con los seis ELISA desarrollados con antígenos recombinantes (Eno1, Als3-N, Hwp1-N, Adh1, 14-3-3 y Met6). Aunque la sensibilidad es algo inferior a los valores publicados para la detección de CAGTA, este diseño es un método objetivo, reproducible y permite analizar en un mismo ensayo un número elevado de muestras. La detección de anticuerpos mediante un microarray (micromatriz) de 11 proteínas de C. albicans (Eno1, Als3-N, Hwp1-N, Eno1-RM, Bgl2, Grp, Pgk1, Fba, Pdc, Adh1, CW-Eno) mostró una utilidad diagnóstica limitada cuando se analizó cada proteína por separado, siendo la CW-Eno la única excepción. Sin embargo, considerando los resultados del microarray en conjunto o en grupos de proteínas seleccionadas (CW-Eno, Pgk1, Eno1 y Grp; o CW-eno y Pgk1) el sistema mostró ser una herramienta útil para el diagnóstico de la CI.