El peróxido de hidrógeno como mediador en el proceso de contracción-relajaciónestudios "in vitro" e "in vivo"de contracción-relajación

Resumen

Introducción: el peróxido de hidrógeno (H2O2) es uno de los más importantes metabolitos activos derivados del oxígeno (MADO). Está implicado en multitud de procesos intracelulares destacando su papel de la contracción-relajación celular. Durante esta tesis, se analizó el efecto del H2O2 como modulador del proceso de contracción y de relajación, centrándonos en la contracción inducida por 1.4.5 trifosfato myo-inositol (IP3) y en la relajación inducida por la guanilato ciclasa soluble (GCs). Por último, se estudió el papel del H2O2 en la hipertensión inducida por L-NAME. Resultados I: La estimulación crónica con H2O2 de las células musculares lisas de aorta de rata (CML) resultó en una disminución de los niveles de los receptores de IP3 tipo I (IP3R1) y tipo III (IP3R3). Esta disminución fue acompañada de una menor actividad del IP3R así como de la capacidad contráctil de las CML incubadas con H2O2. Esta disminución fue revertida cuando las CML fueron preincubadas con MG132, que es un inhibidor de la actividad del proteasoma, aunque no se observó un incremento en los niveles de ubiquitinización de los IP3Rs. Por otro lado, se estudió el papel del H2O2 en la disminución de los IP3Rs inducida por angiotensina II (ANGII), observándose una reversión en el efecto de la ANGII en los niveles de los IP3Rs. Resultados II: La estimulación crónica con H2O2 de las células musculares lisas de aorta de rata (CML) resultó en un aumento de los niveles de la subunidad b1 de la GCs, mientras que la a1 permaneció inalterada. El incremento de la subunidad b1 alcanzó su máximo a las 4 horas de tratamiento., revirtiéndose a las 8 horas de tratamiento. Además, este aumento fue acompañado de una mayor actividad de las GCs de las CML incubadas con H2O2 y estimuladas con oxido nítrico (NO), medida como producción de guanosin monofosfato ciclico (GMPc). El mecanismo implicado en dicho aumento es independiente de los cambios de la expresión génica, ya que no se observo cambios en la actividad del promotor de la subunidad b1 cuando las CML fueron incubadas con H2O2. Por ultimo, se analizaron los niveles de la proteína quinasa G (PKG) en CML incubadas con H2O2 observándose un incremento en los niveles de la proteína alcanzándose su máximo a las 8 horas de incubación. Resultado III: Por último, se analizó del H2O2, producida de forma endógena, en el incremento de la tensión arterial inducida por L-NAME. Los resultados mostraron una menor respuesta presora al L-NAME de los ratones que sobreexpresan catalasa (CAT) con respecto a los de fenotipo salvaje (WT). Además se observo, en el tejido cardiaco, una reversión del daño oxidativo en los ratones. CAT así como en el incremento de la subunidad b1 de la GCs observada en los ratones WT. Por ultimo, la función renal no se vio afectada en ninguno de los grupos de ratones (CAT Y WT) utilizados.