Tiamulina y tilosina como tratamientos alternativos contra la loque americana

Resumen

La Loque americana es una enfermedad que actualmente está contribuyendo a diezmar las colonias de abejas melíferas. El tratamiento que por ahora se ha mostrado más eficaz para combatirla es el empleo de antibióticos que, obviamente, no deben dejar residuos en los productos de la colmena para así no afectar posteriormente a la salud de los consumidores. Desgraciadamente los ensayados hasta ahora, sulfamidas y tetraciclinas, no sólo se han mostrado poco eficaces, sino que además han generado problemas de aparición de cepas resistentes. De ahí que la investigación se dirija a la búsqueda de nuevos antibióticos con mayor eficacia y menor toxicidad residual. Después de ensayos in vitro se han seleccionado la tiamulina y la tilosina como posibles principios activos alternativos, debiéndose comprobar su eficacia en colmenares experimentales y siendo necesaria una metodología analítica para evaluación de sus residuos. Es en esta línea donde encaja el trabajo aquí desarrollado.%&/El primer apartado de esta Tesis Doctoral se ha dedicado al desarrollo de metodología analítica para comprobar los niveles de residuos que pueden encontrarse en la miel, después del tratamiento con tiamulina en el apiario experimental del Centro Apícola Regional de Marchámalo (Guadalajara) . Se ha utilizado como técnica HPLC, con dos detectores distintos DAD y MS. Después de seleccionar las condiciones cromatográficas, para realizar una correcta cuantificación de la tiamulina ha sido necesario someter a las mieles a un tratamiento previo que ha consistido en una extracción en fase sólida, utilizando cartuchos con relleno polimérico. Dicho método ha sido validado siguiendo la normativa vigente, con unos valores de límite de detección entre 0.5 y 1.2 pg Kg-1 , empleando como detector el MS y sin interferencias. Tras el estudio de las pendientes de las líneas de calibrado obtenidas, se concluye que con una única línea de calibrado se puede cuantificar tiamulina en todas las clases de miel estudiadas, excepto para el caso de la miel de romero, que ha de cuantificarse con su propia línea de calibrado. Las pruebas realizadas con una dosis terapéutica de tiamulina, producían un nivel muy alto de residuos de tiamulina lo que indica que el tratamiento de campo debe ser optimizado.%&/En la segunda parte de la Tesis, se presenta por primera vez un método analítico muy sensible para la separación y posterior determinación de residuos de las cuatro tilosinas, TA, TB, TC y TD, en miel y larvas, empleando de nuevo HPLC con dos detectores distintos DAD y MS. Una vez seleccionadas las condiciones cromatográficas, fue necesario someter a las mieles a un tratamiento previo que ha consistido en una extracción en fase sólida, utilizando cartuchos con relleno polimérico para cuantificar la TA, TB, TC y TD. Este método ha sido validado y presenta como características más significativas, unos valores de límite de detección de entre 2 y 3 ug Kg-1 para todos los analitos empleando el detector MS sin interferencias, con un intervalo lineal de 9 a 500 pg Kg-1 para TB, TC y TD y de 9 a 2000 ug Kg-1 para TA y TB, lo que facilitará la determinación de residuos de principio activo en los casos más desfavorables. Las muestras de miel procedentes de diferentes colmenas tratadas, presentaban residuos de TA, TB, TC y TD en cantidades muy elevadas lo que implica que en la metodología a regular deberán ser tenidos en cuenta los cuatro compuestos..%&/Para realizar la determinación de TA, TB, TC y TD en larvas ha sido necesario también optimizar un tratamiento previo que ha consistido en un secado de las larvas, seguido de una dilución y una centrifugación. El método ha sido validado con unos valores de límite de detección entre 1 y 6 pg Kg-1 para todos los analitos empleando el detector MS libre de interferencias, con un intervalo lineal de 20 a 500 pg Kg-1 para TB, TC y TD y de 500 a 2000 pg Kg-1 para TA y TB. Se ha aplicado a muestras de larvas a fin de comprobar la eficacia del tratamiento.%&/Los estudios sobre la tilosina han merecido la atención de la Empresa CALIER S.A. que pretende crear un alimento para abejas que incorpore dicho principio activo, para cuyo control también se ha desarrollado y validado una metodología basada en el empleo de LC-DAD. Se ha aplicado y optimizado un método analítico para la determinación de tilosina A en un formulado veterinario denominado provisionalmente como apilosina. El método ha sido validado y como características más significativas una muy buena selectividad, unos límites de detección del orden de 30 pg Kg-1 para todos los analitos, con un intervalo lineal amplio, y mostrando una muy buena precisión y exactitud.