Estudio del ensamblaje ribosómico en Saccharomyces Cerevisae

Resumen

El ribosoma de la levadura Saccharomyces cerevisiae, está formado por dos subunidades denominadas subunidad pequeña formada por 1 rRNA 18S y 33 proteínas ribosómicas, y una subunidad grande formada por 3 rRNAs (5S, 5.8S y 25S) y 46 proteínas ribosómicas. El ribosoma es la ribozima encargada de realizar la síntesis de proteínas en todos los organismos. La síntesis proteica es un proceso muy costoso para la célula y está muy controlado a distintos niveles para asegurar una correcta traducción de los RNA mensajeros en proteínas. Por todo ello, la biogénesis del ribosoma en sí presenta para la célula un coste muy elevado y sigue unos estrictos controles de calidad en sus distintas fases de procesamiento y maduración. En esta Tesis hemos abordado la caracterización funcional de dos proteínas ribosómicas L14 y L16 componentes de la subunidad grande (60S) del ribosoma maduro. La proteína L14 es esencial, está bien conservada tanto en eucariotas como en arqueas pero no está presente en el ribosoma bacteriano. La proteínas L14 de eucariotas presenta una extensión C-terminal que no aparece en su ortóloga de arqueas. La proteína L16 es esencial, está bien conservada tanto en eucariotas como en arqueas y bacterias. Y la proteína eucariota presenta una extensión C-terminal que no está presenta en su ortóloga bacteriana ni de arquea. Para llevar a cabo el estudio funcional de estas dos proteínas ribosómicas reprimimos transcripcionalmente sus respectivos genes y posteriormente mediantes técnicas de northern blot, primer extension, perfiles de polirribosomas, etc, observamos los diferentes fenotipos que aparecían tras su represión transcripcional. Observamos que son proteínas que se ensamblan en etapas tempranas de la biogénesis del ribosoma y que la represión de estas dos proteínas presentan resultados similares como un descenso en la cantidad de subunidades 60S, afectan negativamente al correcto procesamiento del rRNA, perjudica el transporte nucleo-citoplasmático de las partículas pre-ribosómicas entre otros fenotipos observados. Ambas proteínas se localizan en la superficie de la subunidad 60S y presentan interacciones físicas entre ellas. Trabajos publicados del Prof. Milkereit han demostrado que la ausencia de la proteína L16 en el contexto de la biogénesis del ribosoma afecta negativamente al ensamblaje de la proteína L14, por otro lado según nuestros análisis podemos sugerir que no ocurre a la inversa, y que la ausencia de L14 no afecta en principio al ensamblaje de la proteína L16 en el ribosoma.