Estudio del checkpoint de replicación del adn. Respuesta independiente de atr y atm en células tumorales y no tumorales

Resumen

Las células ecuariotas presentan elegantes mecanismos de control del ciclo celular destinados a evitar la división de las células cuando las condiciones no son las adecuadas. Estos mecanismos se conocen como Checkpoints y pueden ser activados por daños en el DNA, problemas en la replicación del DNA o en la alineación de los cromosomas metafásicos. En esta tesis se ha estudiado el Checkpoint que se activa cuando se inhibe la replicación con hidroxiurea (HU) en células de mamífero, comparando células tumorales y no tumorales. En el laboratorio y se había descrito la capacidad de las células no tumorales NRK y NIHT3T3 de activar el Checkpoint de replicación a pesar de la inhibición con cafeína de las principales quinasas de respuesta descritas hasta el momento, ATR y ATM. Sin embargo había disparidad de respuestas entre las células tumorales habiendo algunas capaces de evitar la entrada en mitosis en presencia de HU (respuesta S/M) al inhibir ATR y ATM (HeLa, SW480) y otras en cambio incapaces de llevar a cabo esta parada (HCT116, HT29, CaCo2). En esta tesis se demuestra que las células tumorales HeLa responden a HU independientemente de ATR y ATM pero dependientemente de la activación de Chk1 de manera distinta a la clásicamente descrita fosforilación de la serina 345 y 317. Además dicha activación del Checkpoint no depende de DNA-PK ni de ninguna PL3K quedando pro determinar qué tipo de modificación posttraduccional regularía a CHk1 y por parte de qué proteínas. En estas células hemos analizado la importancia de proteínas sensores y mediadoras de la vía y hemos visto que la presencia de Rad17 no es esencial para la respuesta dependiente e independiente de ATR/ATM pero sin embargo la mediadora Claspina es importante para la respeta S/M del Checkpoint de replicación cuando se inhibe ATR/ATM, viéndose una relaicón entre esta proteína y la regulación a la baja de la Ciclina B1, importante para la entrada en mitosis. Además, se ha d