Iniciación de la replicación del DNA en arabidopsis regulación de los componentes CDC6, CDT1 y ORC1 del complejo pre-replicativo

Resumen

La iniciación de la replicación es un proceso muy controlado durante el cual se produce la formación y consiguiente activación de los complejos pre-replicativos. La formación de dichos complejos pre-replicativos consiste en un ensamblaje secuencial y ordenado de las proteínas o macrocomplejos proteícos ORC, CDC6, CDT1 y MCMs al origen del replicación, siendo este ensamblaje uno de los principales sistemas de control de la iniciación de la replicación. A esta Tesis Doctoral hemos aislado y caracterizado los componentes CDC6, CDT1 y ORC1 de Arabidopsis thaliana, componentes que no habían sido caracterizados hasta la fecha. Esta identificación nos ha permitido estudiar los diferentes mecanismos que regulan la disponibilidad de dichas proteínas en plantas. Hemos encontrado que cada una de estos tres componentes posee dos isoformas codificadas por dos genes diferentes, pero sólo en el caso de AtCDC6, esta duplicación génica se debe a una duplicación cromosómica. Los datos que se presentan demuestran que AtCDC6 está altamente regulada a nivel de transcripción, tanto durante el desarrollo como durante el ciclo celular. AtCDC6 también está regulada a nivel de fosforilación ya que interacciona y se fosforila in vitro por complejos ciclina/CDK. Además, AtCDC6 se degrada en extractos de Arabidopsis por la ruta del proteosoma. Asímismo, AtCDT1 también interacciona tanto in vitro como in vivo con complejos CDK/ciclina y concretamente se fosforila in vitro por AtCDC2a/CycD2 y AtCDC2/CycA, sugiriendo que la regulación de CDT1 por fosforilación es dependiente de ciclo celular. Por su parte, AtORC1 está sujeto a regulación por transcripción tanto a lo largo del ciclo celular, poseyendo un pico de expresión al comienzo de la fase S, como durante el desarrollo. Es más, el uso de diferentes técnicas de detección de transcripción, apuntan a que los dos genes que codifican AtORC1 están sujetos a expresión diferencial,