Caracterización del bloqueo y la progresión asimétrica de las horquillas de replicación

Résumé

Los orígenes Co1E1 funcionan: como barreras de replicación, deteniendo la progresión de las horquillas de forma polar resultando en la acumulación de intermediarios de replicación con una burbuja interna. La deleción de los diversos componentes funcionales de replicación Co1E1 ha permitido establecer que la asociación estable del RNAII en la región del origen es el único requerimiento indispensable tanto en la iniciación, como en la parada de las horquillas de replicación. El empleo de la técnica de "repeated primer extension" ha puesto de manifiesto que este híbrido es procesado por la RNasa H en dos posiciones, distantes 17 pb, generando dos extremos 3'OH alternativos que son utilizados como cebador para el inicio de la síntesis de DNA. Hemos demostrado que la helicasa replicativa DnaB resulta incapaz de resolver híbridos RNA-DNA. La inhibición de la actividad helicasa de DnaB, que lidera el replisoma, sería la responsable del bloqueo de las horquillas de replicación al interaccionar con el extremo 3'OH del RNAII en su origen Co1E1 inactivo..