Mecanismos reguladores de la función de CDC6 y CDT1 en la poliploidización megacariocítica

Resumen

La mayoría de las células somáticas aseguran el mantenimiento de la ploidía por alternancia de la fase S y M del diclo celular, a través de un sistema de licencia que garantiza el inicio de la replicación del ADN una única vez por ciclo. En la fase G1, los factores de licencia cdc6 y cdt1 ensamblan el complejo MCM al origen de replicación. Una vez iniciada la fase S, la fosforilación de cdc6 por CDKs y la expresión de geminina, que inhibe cdtl, mantienen silentes los orígenes de replicación hasta la compleción de la división celular. Algunos tipos celulares, como el megacariocito, escapan a dicho control durante su proceso de diferenciación. En su maduración terminal, el magacariocito alcanza contenidos poliploides de ADN estableciendo ciclos de endorreplicación por entrada repetida en fase S, sin que se produzca división celular intermedia. En este trabajo hemos estudiado el pepal de cdc6 y cdt1 en la endorreplicación megacariocítica, por comparación de dos líneas celulares, HEL y K562, que diferencian hacia megacariocito en respuesta al tratamiento con ésteres de forbol, aunque sólo las HEL establecen ciclos endorreplicativos. Nuestros resultados muestran que estos ciclos se producen con mantenimiento de los niveles nucleares de cdc6 y cdt1, y disminución concomitante de la expresión de geminina. La sobreexpresión de cdc6 es capaz de llevar a las células HEL proliferantes a ciclos de endorreplicación, mientras que la expresión ectópica de geminina impide la poliplidización de estas células tras su tratamiento con TPA. Sin embargo, sólo la expresión de cdc6 está diferencialmente regulada, a través de mecanismos transcripcionales y postraduccionales, en las células endomitóticas. Los factores de transcripción GATA-1 y E2A parecen estar implicados en la inducción de la transcripción de cdc6, a través de una región localizada a 3 Kb en 5' por encima del promotor del gen, y que actúa como amplificado