Implicacion del gen de poligalacturonasa en la simbiosis rhizobium-leguminosaaislamiento, secuenciacion y analisis de expresion

Resumen

En las primeras etapas de la interaccion rhizobium-leguminosa se produce la penetracion de la bacteria a traves de la pared del pelo radical. En este mecanismo de entrada parecen estar implicados enzimas hidroliticos que degradan la pared celular. El objetivo de este trabajo ha sido determinar la existencia de enzimas pecticos en leguminosas y analizar su posible implicacion en la simbiosis. Se ha clonado el gen de poligalacturonasa (pg) de tomate bajo el control de los promotores tac y trc y expresado en e. Coli y en rhizobium, lo que ha permitido poner a punto las tecnicas de deteccion de actividad pg. Se han aislado y secuenciado tres productos de pcr, con homologia a regiones conservadas entre diferentes pgs de plantas, a partir de adn genomico de m. Truncatula (e2 y e3) y de adnc de polen de m. Sativa (pl1) y otros dos a partir de trifolium subterraneum (tf6 y tf7). E2 y pl1 pertenecen a un gen de pg que forma parte de una pequeña familia genica y que se expresa fuertemente en flores maduras y no en raices o nodulos. E3 pertenece a un gen de pg que se encuentra en una sola copia y se expresa en raices inoculadas con la cepa silvestre de r. Meliloti y muy debilmente en raices no inoculadas o inoculadas con un mutante nod-. La expresion se detecta en raices un dia despues de la inoculacion. Los transcritos no se detectan en flores y si en nodulos inducidos por la cepa silvestre. Se ha detectado una induccion en nodulos de 31 dias inducidos por la cepa silvestre con respecto a nodulos de 7 dias y, ademas, una mayor expresion en nodulos inducidos por un mutante fix exo- con respecto a los nodulos inducidos por la cepa silvestre. Tambien se ha detectado una ligera induccion de la expresion en raices heridas e inoculadas con pseudomonas 17 horas despues de haberse tratado. Se ha clonado y secuenciado parcialmente el gen de pg de m. Sativa de expresion en nodulo y raiz. Este fragmento presenta tres intrones, codificando el orf iden