Identificación y caracterización molecular de la estructura subcelular responsable del control citoplasmático de la expresión del gen de la subunidad de la H+-ATP sintasa del hígado de rata

Abstract

Durante la realización de esta tesis hemos pretendido abordar determinados aspectos del control post-transcripcional de la expresión del mRNA de la subunidad del complejo Fl-ATPasa (mRNA) en hígado de rata. Se ha identificado, y purificado parcialmente, una estructura subcelular densa a electrones "gránulo" de aproximadamente 150 nm de diámetro, para la localización específica del mRNA en el hepatocito de rata. Este gránulo es específico de hígado, puesto que no se aprecia en otros tejidos como corazón, riñón y cerebro, además esta localización es independiente del momento del desarrollo estudiado. Por tanto, es en estos gránulos donde se regula la expresión citoplasmática del mRNA. En este sentido hemos demostrado que la estabilidad del mRNA es mayor durante la etapa perinatal que durante la etapa adulta. Asimismo, hemos demostrado que los gránulos son estructuras traduccionalmente activas, por otra parte hemos demostrado que Hsc70 interacciona en el hígado de rata con la proteína precursora de Fl. Se han identificado dos secuencias en el mRNA capaces de interaccionar específicamente con proteínas del hígado de rata. Estas secuencias se localizan en la región 5' codificante del mRNA (2) y en la región 3' no traducible del tráncrito (3'UTR). La secuencia 1.2 es imprescindible para conferir al mRNA un comportamiento particular en gradientes de densidad y requiere de la secuencia 3'UTR para otorgar al tránsito la gran densidad que lo caracteriza. Además se ha purificado y secuenciado la proteína p53 que interacciona con el 3' UTR del mRNA. Esta proteína candidata a regular la traducción del mRNA durante el desarrollo es la aspartin-tRNA-sintetasa de rata.