Análisis de los marcadores de angiogénesis en las varices primarias y recurrentes. Impacto de la endoglina

  1. Carnicero Martínez, Jose Antonio
Supervised by:
  1. Francisco S. Lozano Sánchez Director
  2. Miguel Pericacho Bustos Director

Defence university: Universidad de Salamanca

Fecha de defensa: 05 September 2022

Committee:
  1. Francisco Javier Serrano Hernando Chair
  2. José Angel Torres Hernandez Secretary
  3. J. A. González Fajardo Committee member
Department:
  1. CIRUGÍA

Type: Thesis

Abstract

La enfermedad varicosa como expresión de la insuficiencia venosa crónica es una de las patologías más frecuentes. Su prevalencia en la población española se ha calculado en torno a un 30%. sitúandose en el Top-10 de las cirugías más frecuentemente realizadas y de mayor lista de espera siendo la tercera causa de inclusión en nuestro país. Su etiopatogenia multifactorial en la que se incluyen factores ambientales y genéticos ha sido estudiada a lo largo del tiempo sin poder responderse a cual es factor desencadenante, y si la alteración hemodinámica y valvular preceden a los cambios parietales o viceversa, involucrándose la hipoxia de la pared, la inflamación y el remodelamiento parietal como los ejes de su fisiopatología. Tales cambios biomoleculares definen la disfunción endotelial, un escenario que combina stress oxidativo y reducción del óxido nítrico, con aumento de la permeabilidad vascular y un status proinflamatorio favorecedor de la adhesión leucocitaria y de fenómenos angiogénicos. En la recurrencia varicosa (VR) que supone hasta el 20% las reintervencionesson más complejas, más largas y con una menor satisfacción del paciente. En las recurrencias a pesar de un correcto diagnóstico y una depurada técnica en la operación inicial, la neovascularización es muy frecuente. En la neovascularización en la unión safenofemoral en el área cicatricial, la hipoxia e inflamación locales actúan como detonantes para la liberación de factores angiogénicos responsables de crear una red de neovasos que reconectan con venas de proximidad. HIPÓTESIS Los factores HIF (factor transcripcional inducible por hipoxia tipo 1), VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) y sus receptores VEGFR-1 y VEGFR-2 han sido investigados en la secuencia angiogénica, pero no lo han sido tanto en la recurrencia por neocayado. Endoglina pese a su papel fundamental en el endotelio, modulando la angiogénesis y la inflamación tampoco ha sido objeto de estudio. Por ello nos planteamos como hipótesis que tales moléculas relacionadas con la angiogénesis, y endoglina como molécula menos estudiada, podrían estar involucradas en el desarrollo de varices y en su recidiva OBJETIVOS Comparar la expresión tisular de biomarcadores de angiogénesis en biopsias del cayado de pacientes con varices esenciales, y en recidivas por neocayado angiogénico, y compararlas con muestras de R3 distales. Igualmente comparar sus variaciones en la expresión sérica pre y postoperatoria a 3m. Alternativamente, estudiar si la sobreexpresión prolongada de endoglina respecto a los pacientes con enfermedad primaria estuviese involucrada en el desarrollo de un neocayado neoangiogénico, y evaluar un potencial impacto de sEng o endoglina soluble como marcador predictivo de recurrencia. Finalmente, analizar si los marcadores pueden presentar correlación con el grado de expresión clínica de la enfermedad en general, y en particular si es enfermedad primaria o recurrente. MATERIAL Y METODOS Reclutamiento de un primer grupo con varices primarias PVV (n=24) y un segundo grupo RVV ( n=21) siendo pacientes en grados CEAPC3 o superior en más de un 70% de los casos. Su obtuvieron biopsias incisionales de la unión safeno femoral de venas safenas insuficientes y de neocayados angiogénicos y muestras R3 distales siendo procesadas mediante PCR a tiempo real o qPCR. Alternativamente se realizaron determinaciones de suero el día de la IQ y una segunda muestra postoperatoria a los tres meses mediante tecnología Luminex o ensayo de inmunodetección multiplexada fluorométrico (MFIA). Se realizó el análisis y procesamiento estadístico correspondiente y los resultados de los valores de expresión relativa de los biomarcadores, obtenidos por qPCR representaron en box-plot). Para las determinaciones de moléculas solubles en sangre, los datos se presentan en gráficos de columnas Se utilizaron pruebas t para el análisis entre grupos y ANOVA para las comparaciones entre los CEAP. Se aplicó la prueba de normalidad de D'Agostino-Pearson a los conjuntos de datos antes de las comparaciones estadísticas. CONCLUSIONES En las determinaciones tisulares no hubo diferencias en la expresión génica de HIF-1α entre grupos (varices primarias o recidivadas) tanto en las biopsias de localización proximal en unión safenofemoral, como en las determinaciones distales y si una mayor expresión génica de marcadores proangiogénicos (endoglina y VEGF y sus receptores VEGFR-1 Y VEGFR-2) en las muestras con neocayado, respecto de las muestras del cayado safeno-femoral de los pacientes con varices primarias, o en las procedentes de biopsias R3 de la zona distal. En las determinaciones séricas no se observaron diferencias en los niveles séricos de endoglina, VEGF y su receptor VEGFR2 entre el grupo de pacientes con recidiva RVV y el de varices primarias PVV, ni preoperatoria ni postoperatoriamente a los tres meses. Los niveles séricos preoperatorios de la forma soluble del receptor VEGFR1, con propiedades antiangiogénicas, son inferiores en el grupo de varices recidivadas RVV que respecto del grupo de varices primarias. En los grados clínicos C de la clasificación CEAP, no están relacionados con la expresión de los genes o la secreción de los factores solubles estudiados pero de forma aislada, en el grupo con varices primarias se observa que los pacientes CEAPC2 presentan mayores niveles de endoglina sérica respecto del resto de grados “C”.