Implicación de la expresión condicional de HGAL en modelos murinos de linfoma de células grandes B difuso

Resumen

Los linfomas de células grandes B difusos (LCGBD) son tumores clínica y genéticamente heterogéneos. La desregulación de diversos procesos biológicos específicos de las células B, como la señalización del receptor de células B (BCR) y la regulación de la motilidad, contribuyen a la linfomagénesis. La proteína HGAL (del inglés human germinal associated lymphoma) es una proteína adaptadora específica de las células B que controla su motilidad y la señalización del BCR. En las células B normales, el gen HGAL se expresa en el centro germinal y rápidamente es reprimido. La mayoría de los LCGBD, principalmente los del centro germinal (GCB), aunque en menor medida los de tipo activado (ABC), expresan HGAL. Para investigar las consecuencias de la expresión constitutiva de HGAL in vivo, generamos ratones que expresaban condicionalmente HGAL humano en diferentes etapas del desarrollo hematopoyético usando 3 enfoques restringidos mediados por la recombinasa Cre para iniciar la expresión de HGAL en las células madre hematopoyéticas, las células pro-B o las células B del centro germinal. Tras la estimulación inmunológica, se observaron centros germinales más grandes en ratones en los que se inició la expresión de HGAL en células B del centro germinal, lo que puso de evidencia su implicación en el proceso tumorogénico: en el examen macroscópico estos animales presentaban una marcada esplenomegalia causada por grandes tumores, independientemente del promotor que controla la expresión de HGAL. Los tres modelos de ratón desarrollaron LCGBD con una frecuencia del 12% al 30% a partir de los 13 meses, lo que condicionó una supervivencia más corta: 21 meses, 20 meses y 16 meses de supervivencia específica media las cohortes de Rosa26HGAL/Aid-Cre, Rosa26HGAL/Mb1-Cre y Rosa26HGAL/Sca1-Cre, respectivamente. Los estudios inmunohistoquímicos revelaron que todos los linfomas eran del tipo BGC, con infiltración nodular difusa de los órganos afectados por grandes células linfoides pleomórficas que expresaban B220, PAX5, HGAL, PNA e IRF4. Además, en estos modelos murinos la sobreexpresión condicionada de HGAL dio lugar a una evidente afectación extraganglionar con afectación del hígado y de los ganglios linfáticos en los ratones Rosa26HGAL/Sca1-Cre, del riñón y del páncreas en los ratones Rosa26HGAL/Mb1-Cre y del riñón y del hígado en los ratones Rosa26HGAL/Aid-Cre. El estudio de microarrays puso de manifiesto la presencia de una marcada expresión diferencial entre las células con linfoma y los esplenocitos B normales en la que destacaba una sobreexpresión del regulador de la señalización de proteína G1 (RGS1), relacionado con la regulación de la migración celular y de RAB10. El análisis de los genes expresados diferencialmente entre las células esplénicas B de los tres modelos murinos en comparación con ratones control de la misma camada reveló un enriquecimiento en genes comunes a los tres modelos entre los que destacaba una sobreexpresión en los linfomas de la señalización de mTORC1, la respuesta de interferón, las dianas E2F y la señalización de la vía IL-6/JAK/STAT3. La secuenciación del exoma completo de 8 muestras de tumores murinos reveló la presencia de 124 mutaciones sin-sentido o de sentido erróneo en 110 genes, con una media de 15 por tumor (número similar a la mediana de 17 alteraciones genéticas por tumor encontradas en los LCGBD humanos). Algunos de los genes mutados ya habían sido descritos previamente en tumores humanos del tipo LCGBD, con 18 mutaciones detectadas previamente, de forma recurrente, en un 0.7% de los LCGBD humanos : PIM1, GNA13, FAS, PDF4DIP, NFKBIA y PTPN6. Posteriormente, la secuenciación del ARN mostró que todos los tumores murinos analizados expresaban BCL6. Es posible que la ausencia de expresión de BCL6 en algunos tumores con expresión de HGAL pudiera deberse a la estimulación mejorada del BCR con HGAL en estos tumores, tal y como se ha descrito en algunos estudios que muestran una disminución en la expresión de proteína proteica de BCL6. El análisis del reordenamiento de las inmunoglobulinas confirmó que todos los tumores de células B eran clonales y tenían mutaciones somáticas independientemente del impulsor del promotor encargado de la expresión de HGAL. Nuestros resultados demuestran que la expresión forzada constitutiva de HGAL conduce al desarrollo de LCGBD de tipo BCG.