Noves aproximacions terapèutiques per la distròfia muscular de duchenne i validació d’estratègies diagnòstiques per als pacients amb malalties neuromusculars pediàtriques

Resumen

Los trastornos neuromusculares pediátricos son enfermedades minoritarias causadas por un gran número de genes, muchos de ellos de gran tamaño y de estructura compleja, hecho que dificulta el diagnóstico molecular i el diseño de nuevas estrategias terapéuticas. Ante este reto, esta tesis se ha centrado en dos hitos principales. Por un lado, en analizar el abordaje de dos aproximaciones terapéuticas para la DMD, y, en segundo lugar, en la optimización de las herramientas diagnósticas para los pacientes con enfermedades neuromusculares. Las dos aproximaciones terapéuticas para la DMD son: - Profundizar en el conocimiento del efecto de los estrógenos (E2) en el músculo esquelético tratando el modelo murino deficiente en distrofina. Esto ha permitido demostrar el efecto beneficioso de l’E2 reduciendo los niveles de creatina quinasa y disminuyendo los acúmulos de calcio intracelular, actuando como a estabilizador de membrana. Además, el estudio de expresión génica diferencial revela que el E2 genera la sobreexpresión de genes relacionados con la miogénesis i las células satélite. También genera la sobreexpresión del receptor de neurotrofinas de baja afinidad p75NTR. Este receptor se expresa en células satélite i en la membrana sarcoplasmática de fibras en regeneración. Se postula que su ligando es NGF, proteína que es degradada por MMP-9 (también sobreexpresada por E2). En resumen, parece ser que E2 se encuentra promoviendo la supervivencia celular en el músculo esquelético. - Comprobar la eficacia del fármaco PTC124 sobre las mutaciones nonsense en el modelo murino mdx, restableciendo la expresión de distrofina. No se ha podido observar incremento de la proteína en los animales tratados con el fármaco pero si en aquellos inyectados con su vehículo, el DMSO. Se postuló que la no funcionalidad se podía deber a que el PTC124 no llegaba a su tejido diana. Por eso, se planteó el uso de nanopartículas mesoporosas de sílice, demostrando que eran una buena estrategia por su tropismo por el músculo inflamado. Y la aproximación diagnóstica para los pacientes con enfermedades neuromusculares pediátricas fue: - Analizar el rendimiento diagnóstico de nuevas técnicas de secuenciación masiva (exoma completo y exoma clínico) en estos pacientes. Mediante esta aproximación hemos podido demostrar que el rendimiento diagnóstico de estas técnicas depende de un fenotipaje clínico bien definido. En estas condiciones, el análisis mediante exoma clínico ha resultado tener un mejor rendimiento que el exoma completo. Además, la validación funcional de las variantes consideradas de significado incierto (VUS) es necesaria para la confirmación de los diagnósticos.