Efectos terapéuticos del Cannabidiol en la epilepsiaun estudio preclínico en el modelo animal de epilepsia audiogénica GASH/sal

  1. Cabral Pereira, Giselda Eunice
Supervised by:
  1. María Dolores López García Director
  2. Ricardo Gómez Nieto Co-director

Defence university: Universidad de Salamanca

Fecha de defensa: 28 July 2023

Committee:
  1. María Josefa García Barrado Chair
  2. María Elena Díaz Casado Secretary
  3. Antonio Viñuela Sanchez Committee member

Type: Thesis

Abstract

La epilepsia es una enfermedad presente desde tiempos antiguos en la historia de la medicina. Se trata de una afección neurológica frecuente que se caracteriza por la presencia de crisis recurrentes. Actualmente, el tratamiento principal para la epilepsia consiste en la administración de fármacos anticrisis, con más de 30 medicamentos disponibles en la práctica clínica. Por lo general, se prefiere utilizar un solo fármaco (monoterapia) con el fin de evitar efectos adversos. Sin embargo, aproximadamente un tercio de los pacientes no responden adecuadamente a este tratamiento y se recurre a la combinación de varios medicamentos simultáneamente. A esta condición se le conoce como epilepsia farmacorresistente. El cannabidiol (CBD), un componente del cannabis sin efectos psicoactivos ha demostrado tener propiedades anticrisis en diferentes modelos pre-clínicos, sin embargo, existen pocas evidencias de su eficacia en modelos de crisis audiogénicas. En nuestro laboratorio, contamos con un modelo de hámster que sufre epilepsia audiógena de origen genético (GASH/Sal, por sus siglas en inglés Genetic Audiogenic Seizure Hamster from Salamanca), un tipo de epilepsia refleja caracterizada por la aparición de crisis convulsivas generalizadas cuando es expuesto a un estímulo sonoro intenso. Esta tesis doctoral analiza y compara las propiedades neuroprotectoras y anticrisis a nivel comportamental del CBD administrado como monoterapia y en combinación con el ácido valproico (VPA), además analiza los efectos generados después del tratamiento crónico en GASH/Sal machos y hembras. Para ello, nos apoyamos en la utilización de diferentes técnicas como: cromatografía líquida de alta eficacia, etograma, el campo abierto, ensayos enzimáticos, colorimétricos, técnicas de biología molecular, e inmunotransferencia. En primer lugar, el tratamiento exclusivo de las crisis con CBD mostro una respuesta dependiente de la dosis. El uso de la dosis más alta demostró una mayor eficacia en las hembras al reducir o eliminar el índice de severidad relacionado con las crisis audiogénicas. Este resultado se replicó en el modelo de crisis aguda y repetida. Además, se observó una fuerte correlación negativa entre la severidad de las crisis y los niveles de CBD en sangre o cerebro. Por otro lado, la terapia combinada de CBD+VPA no mostró sinergia positiva o negativa sobre las conductas convulsivas y la severidad de las crisis. El uso del CBD se ha asociado además con efectos ansiolíticos, antidepresivos y antipsicóticos. En el GASH/Sal, hemos detectado disminución de la actividad locomotora y los comportamientos exploratorios de forma significativa tras la administración de 100 mg/kg y 200 mg/kg de CBD como tratamiento único, este efecto fue más notorio en el grupo tratado con la combinación de CBD+VPA. Los efectos terapéuticos anticrisis, ansiolíticos, antidepresivos y antipsicóticos podría estar asociado a su influencia en múltiples dianas terapéuticas. El tratamiento con CBD en machos y hembras de modelo de crisis aguda GASH/Sal moduló la expresión génica de los receptores cannabinoides, no cannabinoides y proteína transportadora de nucleósidos en el foco cerebral epileptogénico, específicamente en el colículo inferior. Una de las causas para la interrupción del tratamiento de un fármaco son los efectos adversos asociados a su uso. En el modelo de crisis aguda o repetida GASH/Sal, el tratamiento crónico exclusivo con CBD no provocó cambios en los parámetros hepáticos y hematológicos. Sin embargo, las alteraciones en ciertos parámetros hematológicos observadas en los animales que recibieron la combinación de CBD+VPA se atribuyeron al VPA, ya que eran similares a las observadas en el grupo tratado solo con VPA, a diferencia del grupo tratado únicamente con CBD. Además, no se evidenció variación del peso corporal en todos los animales tratados con CBD, lo que sugiere que el CBD no tiene efectos significativos sobre el balance energético, el metabolismo o la regulación de la ingesta de alimentos. Finalmente, el efecto anti-inflamatorio del CBD se ha visto en diferentes patologías, incluyendo la epilepsia. Nuestros análisis revelaron que la administración crónica de CBD en animales GASH/Sal sin inducción de crisis resultó en modificaciones en los niveles de citocinas pro-inflamatorias y anti- inflamatorias tanto en sangre como en el cerebro. Este efecto fue especialmente notable en las hembras. Esta tesis doctoral proporciona una visión integral del efecto del CBD en el modelo GASH/Sal, considerando el dimorfismo sexual, lo que enriquece la comprensión general y fortalece los resultados obtenidos. Los hallazgos sugieren que la efectividad del CBD como terapia única para el control de las crisis epilépticas depende de la dosis, siendo más eficaz en las hembras. Esto resalta la importancia de considerar factores de género en el diseño y la aplicación de tratamientos con CBD.